蛋白酶分析检测

一、检测样品与目标

‌样品类型‌

‌生物样本‌：包括组织、细胞、体液（如血液、唾液）及体外培养的细胞裂解液‌。

‌纯化制剂‌：酶制剂、重组蛋白酶产品等，需确保样品纯度及稳定性以提升检测准确性‌。

‌核心检测项目‌

‌活性测定‌：评估蛋白酶催化底物水解的能力（最常用指标）‌。

‌理化性质分析‌：包括浓度、分子量、等电点等参数，用于酶功能研究及质量控制‌。

二、常用检测方法

‌方法‌       ‌                                                    原理‌         ‌                                                                                            优缺点‌

‌比色法‌                通过底物水解产物与显色剂反应生成有色化合物，测定吸光度计算酶活性‌。          操作简单、快速，但易受显色剂干扰‌。

‌荧光法‌                检测底物水解产生的荧光产物强度，反映酶活性（如FITC标记底物）‌。                 灵敏度高、特异性强，需控制荧光染料背景干扰‌。

‌化学发光法‌         基于化学发光产物强度与酶活性的线性关系（如鲁米诺体系）                               灵敏度极佳，适用于微量样本，需专用试剂‌。

酶联免疫法‌         利用蛋白酶与特异性抗体结合，通过酶标二抗催化显色反应定量活性‌。                  特异性强，适用于复杂样本，但依赖抗体质‌。

三、检测仪器选择

‌分光光度计‌：适用于比色法，检测波长范围覆盖常见显色反应（如595nm考马斯亮蓝法）‌。

‌荧光光度计‌：用于荧光法，需匹配激发/发射波长（如Ex 488nm/Em 520nm FITC检测）‌。

‌化学发光仪‌：高灵敏度检测化学发光信号，适用于低丰度蛋白酶分析‌。

‌酶标仪‌：高通量检测，支持96/384孔板，兼容比色、荧光及化学发光法‌。

四、应用场景

‌基础研究‌：解析蛋白酶在代谢、凋亡等生理/病理机制中的功能‌。

‌疾病诊断‌：检测血液中特定蛋白酶活性（如凝血酶、胰蛋白酶）辅助疾病筛查‌。

‌药物开发‌：筛选蛋白酶抑制剂或激活剂，评估药物效价及毒性‌。